一文搞懂 PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR 及优缺点

PCR——实验室必备实验，从基因鉴定到信号通路验证，几乎每周都要做那么几次。

然而，各种PCR技术，包括PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR、Real-Time PCR和dPCR，长得实在是太像了，好多同学看得头晕眼花也没弄明白这几种PCR有什么区别。

今天，一篇文章，带你清清楚楚，明明白白一次性搞明白各种PCR之间的区别。

一、什么是PCR？

PCR是聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）的简称，是美国科学家Kary B. Mullis 1985年发明的一种在体外快速扩增特定DNA片段的分子生物学技术。通过一系列精心设计的反应步骤，PCR可以在短时间内将微量的DNA片段扩增到足够数量，用于后续的研究和检测。

二、PCR技术的介绍

按照PCR技术的演进，习惯将PCR技术划分为三代：普通PCR技术；实时荧光定量PCR技术（qPCR）；第三代数字PCR技术（dPCR）

（1）普通PCR技术

普通PCR即第一代PCR技术，以双链DNA为模板，以dNTP为底物进行扩增，特异性地扩增双链DNA的过程，然后采用琼脂糖凝胶电泳对产物进行定性分析。

（2）实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR, qPCR）

实时荧光定量PCR，即第二代PCR技术，是指在整个扩增的过程中，引入了荧光染料或者荧光基团，随着DNA数量的成倍增加，反应体系中的荧光信号也会增强。

（3）数字PCR

数字PCR（Digital PCR，Dig-PCR，dPCR）即第三代PCR技术，是对原始PCR的另一种改进，是一种能够实现核酸绝对定量的精准检测技术。

三、易混淆的PCR概念

很多人误以为RT-PCR是Real-time PCR的缩写，因此将二者混为一谈，但实际上是不一样的，国际上的约定俗成的是：RT-PCR特指反转录PCR，而Real-time PCR一般缩写为qPCR（quantitative real-time PCR）（见前面的介绍）。

四、总结

1.PCR，通常指的是普通PCR，以双链DNA为模板，以dNTP为底物，定性扩增双链DNA。

2.qPCR和Real-time PCR，指的是实时荧光定量PCR，以cDNA为模板，以dNTP 为底物，对扩增出的DNA进行定量分析。

3.RT-PCR，指的是逆转录PCR，以由mRNA逆转录成的cDNA为模板，以dNTP 为底物，进行DNA的扩增，属于PCR的变种，结果只能定性，不能定量。

4.RT-qPCR，指的是实时荧光定量逆转录PCR，是qPCR+RT-PCR的组合，将总RNA或mRNA逆转录成cDNA后再作为模板，以dNTP为底物，进行qPCR的定量分析。